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荧光-PCR法中普通PCR和qPCR引物区别解析

更新时间: 2023-03-13  点击次数: 387次
   荧光-PCR法试剂盒具备高特异性,与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;检测灵敏度可达10-100拷贝;该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;多种双重PCR检测及三重PCR检测试剂盒。
  荧光-PCR法中的普通PCR和qPCR引物设计原则有哪些区别呢?
  一、二者的相同之处
  序列的查找是一致的;
  序列选取应在基因的保守区段;
  选取合适的扩增片段大小
  避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对;
  避免引物自身形成环状发卡结构;
  Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%;
  引物之间的TM相差避免超过2℃;
  引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基。
  二、二者的不同之处
  qPCR产物长度PCR要求在300bp以内,一般先选80-150bp之间;多对目的基因同时扩增,文献上查来的引物条件会不同,需要设计尽可能条件一致的引物;目的基因含量比较低时,需要设计灵敏度比较高的引物;相对电泳法,qPCR灵敏度比较高,对引物的要求更高,引物二聚体要少,熔解曲线要求单一产物;PCR的目的是进行定量或者相对定量,对扩增的效率有要求,对引物的二级结构要求高。
  普通PCR引物根据实验的要求不同,长度一般是从150bp到几千bp不等;对二级结构要求没有qPCR高;对扩增效率要求不高;可选用梯度PCR仪,选择不同退火温度,对引物退火温度要求不需要一致。

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